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饲料中烟酸的测定

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饲料中烟酸的测定

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1  仪器及试剂

1.1仪 器

1). 分析天平一台(精度0.1mg);

2). 恒温水浴锅一台;

3). 容量瓶;

4). 微量进样器(5ul或10μl)一支;

5). 微量可调移液枪(1000ul)一支、吸头多个

6). 旋涡混匀器一台;

7). 离心机一台;

8). LC-10Tvp高效液相色谱仪;

1.2试 剂

1). 超纯水(18MΩ?cm);

2). 甲醇,色谱纯;

3). 三乙胺;

4). 冰乙酸;

5). 己烷磺酸钠;

6). 烟酸标准品:含量≥99%;

7). 烟酸标准贮备液;

8). 烟酸标准工作液;

1.3  标准溶液配制

烟酸标准贮备液:称取经过干燥的烟酸标准纯品25.0 mg,置于250ml棕色容量瓶中,用移动相溶解,稀释至刻度,于冰箱保存,可放置一周。

烟酸标准工作液液:准确吸取烟酸标准贮备液10ml用流动相稀释至50ml或100ml标准溶液置于带盖小瓶贮存,供液相色谱仪分析用,当日使用。

提取液:取500ml离子水,加10ml乙酸,1.3ml三乙胺,用去离子水定容至1L,此时pH为3.2,过0.45 μm滤膜,取上述溶液850mL与150ml醇混合。

2%的乙腈磷酸缓冲液:称取4.84 g 的磷酸氢二钾,9.82g 磷酸二氢钾溶于去离子水中,加20 ml乙腈,用去离子水定容至1 L,混匀用20%氢氧化钾调节pH至6.5。

碳酸钠溶液:c(Na2CO3)=0.1 mol/L。

2  样品制备

称取试样维生素预混料0.5-1g或复合预混料1-5g精确至0.0001g。置于100ml的棕色容量瓶中,加入10ml碳酸钠溶液,浸湿试样加70ml提取液混匀,于超声波水浴中振荡提取15min,用提取液定容至刻度,混合均匀,过滤或离心。再经0.45μm滤膜过滤,进样测定。

3  色谱条件

色谱柱:Vertex C18色谱柱 250mm×4.6mm×5μm;

流动相:2%的乙腈磷酸缓冲溶液;

流速:1.4mL/min;

温度:室温;

进样量:20μL;

检测波长:280nm。

4  色谱图

饲料烟酸.jpg

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